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      免疫組化操作技巧
      點擊次數(shù):2037 更新時間:2019-03-13

      免疫組化ABC法

       

      一)、儀器設備
         1)18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫(yī)用微波爐;
          2)水浴鍋

      (二)、試劑 
          1)PBS緩沖液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。
          2)0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液(CB,pH6.0,1000ml):檸檬酸三鈉 3g,檸檬酸 0.4g。
          3)0.5mol/L EDTA緩沖液(pH8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O,用10 mmol/L NaOH調至pH8.0,加水至1000ml。
          4)1mol/L的TBS緩沖液(pH8.0):在800ml水中溶解121gTris堿,用1N的HCl調至pH8.0,加水至1000ml。
          5)酶消化液: a、0.1%胰蛋白酶液:用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液:用0.1N的HCl配制。
          6)3%甲醇-H2O2溶液:用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
          7)封裱劑:
          a、甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩沖液(pH9.0~9.5)等量混合;
          b、油和TBS(或PBS)配制。 
          8)TBS/PBS pH9.0~9.5,適用于熒光顯微鏡標本;pH7.0~7.4適合于光學顯微鏡標本。

      )、   
          SABC法
          1)脫蠟、水化。
          2)PBS洗兩次各5分鐘。
          3)用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2,室溫封閉5~10分鐘,蒸餾水洗3次。
          4)抗原修復。
          5)PBS洗5分鐘。
          6)滴加正常山羊血清封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體。
          7)滴加抗小鼠抗(合適的濃度,室溫1小時或者4℃過夜或者37℃1小時 

        (4℃過夜后在37℃復溫45分鐘)。
          8)PBS洗三次每次2分鐘。
          9)滴加生物素化二抗,20℃~37℃20分鐘。
          10)PBC洗3次每次2分鐘。
          11)滴加試劑SABC,20℃~37℃20分鐘。
          12)PBS洗4次每次5分鐘。
          13)DAB顯色:DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色(鏡下掌握顯色程度)。
          14)蒸餾水洗。蘇木素復染2分鐘、鹽酸酒精分化。
          15)脫水、透明、封片、鏡檢。

       

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