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脲酶（UE）活性檢測試劑盒說明書
規(guī)格：100T/48S 產品內容：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存，臨用前加3mL蒸餾水充分溶解； 試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存；
試劑三 A 液：液體 0.4mL×1 支，4℃保存；
試劑三 B 液：液體 1.6mL×1 瓶，4℃保存；臨用前將 A 液倒入 B 液中混合，待用； 試劑四：液體 2mL×1 瓶，4℃保存；
標準品：液體 1mL×1 支，4℃保存。1mg/mL 氮標準液。
微量法
脲酶（UE）廣泛分布于植物的種子中，也存在于動物的血液和尿液中，某些微生物也能分泌脲酶。UE能夠水解尿素產生氨和碳酸，對尿素轉化起關鍵作用。利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產生的NH3-N來反應UE活性。
可見分光光度計/酶標儀、天平、研缽/勻漿器、低溫離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
操作步驟： 一、樣品處理
1. 組織：按照質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5-10 的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液），冰上勻漿后于4℃，12000g 離心15min，取上清待測。
3. 血清（漿）或其它液體：直接檢測。二、測定操作：
1、可見分光光度計/酶標儀預熱 30min，波長調至 630nm，可見分光光度計蒸餾水調零。
2、將 1mg/mL 氮標準液用蒸餾水稀釋至 2µg/mL 備用。
3、加樣表：
試劑名稱（µL） | 空白管 | 標準管 | 測定管 | 對照管 |
樣品 |
|
| 20 | 20 |
蒸餾水 | - |
|
| 40 |
第 1頁，共 2 頁
試劑一 | - | - | 40 | - |
試劑二 | - | - | 80 | 80 |
充分混勻，于 37℃反應 1h，于 EP 管中或者 96 孔板中加入下列溶液 | ||||
反應混合液 | - | - | 80 | 80 |
蒸餾水 | 80 | - |
|
|
標準液 | - | 80 |
|
|
試劑三 | 16 | 16 | 16 | 16 |
試劑四 | 12 | 12 | 12 | 12 |
混勻，室溫靜止 20min。 | ||||
蒸餾水 | 92 | 92 | 92 | 92 |
充分混勻后測定 630nm 處吸光值，記為 A 空白管、A 標準管、A 測定管和 A 對照管。計算?A 標準=A 標準管-A 空白管，?A 測定=A 測定管-A 對照管。 | ||||
三、計算公式：
1、液體中UE活力的計算：
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘產生1µg NH3-N定義為一個酶活力單位。
UE（U/mL）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷V樣÷T
=0.233×?A測定÷?A標準。
2、組織、細菌或細胞中UE活力的計算：
（1） 按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1µg NH3-N定義為一個酶活力單位。
UE活力（U/mg prot）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(V樣×Cpr)÷T
=0.233×?A測定÷?A標準÷Cpr。
（2） 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產生1µg NH3-N定義為一個酶活力單位。
UE活力（U/g鮮重）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(W× V樣÷V提取)÷T
=0.233×?A測定÷?A標準÷W。
（3） 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1百萬個細菌或細胞每分鐘產生1µg NH3-N定義為一個酶活力單位。
UE活力（U /106 cell）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(細胞數量×V樣÷V提取) ÷T
=0.233×?A測定÷?A標準÷細胞數量。
C標準液：標準液濃度，2µg/mL；T：反應時間，60min；V酶促：酶促反應體系總體積，0.14mL；
V樣：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V提取：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；
W：樣本質量，g；細胞數量：以百萬計。注意事項：
1. ?A測定大于0.6時，建議將反應混合液用蒸餾水稀釋或者樣品用蒸餾水稀釋后在進行測定。
