布魯氏菌病抗體檢測試劑盒

使用說明書

【介紹】

布魯氏菌病（brucellosis，Bru，布病）抗體檢測試劑盒用于檢測牛、羊、豬、犬等動物血清中的布魯氏菌抗體。

本試劑盒采用競爭ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被布魯氏菌抗原。在試驗中，加入稀釋液、待檢血清與酶結(jié)合物，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有布魯氏菌特異性抗體，則與酶結(jié)合物中的酶標(biāo)記抗體競爭板孔中包被的抗原表位，溫育后將多余的游離抗體通過洗滌去除；在微孔中加入TMB顯色液，經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值。

【組份】

【需自備的設(shè)備及試劑】

1. 微量移液器：10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸頭。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶標(biāo)儀。

5. 蒸餾水或去離子水。

6. 洗瓶或洗板機(jī)。

【樣品制備】

取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

【洗滌液的準(zhǔn)備】

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

【注意事項】

1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。

2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。

3. 顯色液和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應(yīng)該注意防護(hù)。

4. TMB（顯色液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。

5. 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。

6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

7. 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得最h的結(jié)果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

8. 抗原包被板為一次性用品，不得重復(fù)使用； 

【操作步驟】

1. 在稀釋板上按1：40稀釋待檢血清樣本以及陰陽性對照品（195µl樣本稀釋液+5µl樣本血清），并吹打均勻

2. 取預(yù)包被的檢測板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取20µl加入到檢測板孔內(nèi)。同時設(shè)陰性對照2孔，陽性對照1孔，取陰性及陽性稀釋液各20µl分別加入反應(yīng)孔中。

3. 然后再加酶結(jié)合物80µl/孔，加入反應(yīng)孔中輕微震蕩混勻（勿溢出），蓋上封板膜，置37℃溫育60分鐘。

4. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)4-6次，最后在干凈吸水紙上拍干。

5. 每孔加顯色液100µl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。

6. 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

【結(jié)果判定】

用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。

試驗成立的條件是：

 陰性對照(N)OD值>0.5，同時陽性對照(P)阻斷率>80%；

計算方法：

PI (阻斷率)= {1 —（樣品OD值 ÷ 陰性O(shè)D均值）}×100%

陰陽性判斷：

PI(阻斷率)>70%則判斷為陽性；

PI≤70%則判斷為陰性。

【有限期】

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個月。

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