細(xì)胞分離是指將組織分散制成細(xì)胞懸液后從中獲取目的細(xì)胞的過程。細(xì)胞純化更進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)從原代培養(yǎng)前成分混雜的異質(zhì)性細(xì)胞懸液中或者從培養(yǎng)物中獲得單一類型細(xì)胞的過程。

　　分離和純化細(xì)胞的過程不僅僅在原代培養(yǎng)之前進(jìn)行的，有時分離和純化細(xì)胞的過程還貫穿于原代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)的過程中，甚至是主要依賴培養(yǎng)過程實(shí)現(xiàn)分離和純化細(xì)胞的目的。

　　細(xì)胞分離純化的方法有密度梯度離心技術(shù)、逆流淘析分離技術(shù)、利用細(xì)胞表面標(biāo)志分離純化細(xì)胞的方法等。

　　密度梯度離心技術(shù)

　　原理：密度梯度離心法是使待分離樣品在密度梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉降或沉降平衡，終分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶的分離方法，又稱區(qū)帶離心。密度梯度離心不僅可依據(jù)樣品顆粒的重量及沉降系數(shù)進(jìn)行分離，還可根據(jù)樣品顆粒的密度、形狀等特征進(jìn)行分離。

　　使用方法：密度梯度離心在整個離心過程中只使用一種轉(zhuǎn)速，中途無需變更實(shí)驗(yàn)參數(shù)，而差速離心則需要進(jìn)行調(diào)整轉(zhuǎn)速、重懸反復(fù)離心等操作。密度梯度離心適宜分離密度有一定差異的樣品，而差速離心則適用于分離混合樣品中各沉降系數(shù)差別較大的組分。

　　優(yōu)點(diǎn)：分離效果好、適應(yīng)范圍廣、 對溫度變化及加減速引起的擾動不敏感。

　　缺點(diǎn)：離心時間長、需制備密度梯度介質(zhì)溶液、對操作者的技能要求較高。

　　劃分：根據(jù)梯度介質(zhì)的濃度及顆粒在其中沉降的行為，密度梯度離心又分為：速度區(qū)帶離心、等密度梯度離心！

　　逆流淘析分離技術(shù)

　　簡述：通過含細(xì)胞介質(zhì)溶液的流力和浮力與細(xì)胞所受離心力之間相互作用而分離細(xì)胞的一種技術(shù)。

　　原理：細(xì)胞置于一特殊的離心室中，離心室成錐形狀，其定點(diǎn)指向沉降方向，細(xì)胞懸浮于以向心方向連續(xù)流動的介質(zhì)溶液中，同時受到離心力的作用。當(dāng)向外的離心力于內(nèi)向的流立即浮力達(dá)到平衡時，每個細(xì)胞將按照它的的沉降速率達(dá)到其平衡位置。

　　常用于：進(jìn)一步分離淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。

　　選擇性細(xì)胞凝集

　　簡述：羥乙基淀粉和纖維素可以使紅細(xì)胞形成大的“錢串”，加速其沉降，從而比其他細(xì)胞更快地從造血細(xì)胞懸液中沉降出去。

　　常用于：這一方法通常用于快速去除大量成熟紅細(xì)胞，而不會對有核細(xì)胞群造成太大的損失。但是，與上面提到的密度梯度離心和逆流淘析步驟一樣，這一方法并沒有使干細(xì)胞群相對于有核細(xì)胞發(fā)生太多的富集。

　　基于不同粘附特性的細(xì)胞分離方法

　　簡述：粘附于某些固相物質(zhì)如玻璃或塑料的表面，使某些類型細(xì)胞的基本生物學(xué)特性之一，但另一些細(xì)胞卻缺乏這種能力；或某些細(xì)胞的粘附能力強(qiáng)，粘附作用快，而某些細(xì)胞的粘附能力弱或粘附作用慢。根據(jù)這些差異，可以分離或消除某些類型的細(xì)胞。這種將粘附較快的細(xì)胞與粘附較慢的細(xì)胞（貨物粘附能力）的細(xì)胞分離開來并分別收集的處理過程就稱為差粘附處理。

　　常用于：分離細(xì)胞懸液中的成纖維細(xì)胞與其它組織細(xì)胞。